Главная

• Антитела
• Реакция антиген-антитело
• Клетки иммунной системы
• История иммунологии
• Иммунохимия
• Продукты на страже иммунитета
• Вакцины
• Общие и частные проблемы иммунологии
• Основы иммунологии

Метод EAC-розеток. Оценка метода

Наибольшая сложность при использовании метода ЕАС-розеток заключается в достижении эффективного разведения амбоцептора при сохранении активности комплемента. Вместо мышиного комплемента можно использовать комплемент человека (свежая АВ-сыворотка). Активность комплемента сохраняется исключительно в свежих или же непродолжительное время хранившихся при —20 °С сыворотках. Связывание комплемента с комплексом ЭБ — АТ (антитело) наблюдается не только в случаях сенсибилизации эритроцитов IgG. В качестве доказательства можно рассматривать отсутствие существенных различий в числе розеток (ЕАС и ЕА) при постановке эксперимента с эритроцитами человека, анти -D- иммуноглобулина и комплемента человека.

Метод ЕАС-розеток с эритроцитами барана особенно требователен к соблюдению намеченных температуры и времени инкубации, а также частоты вращения пробирок с суспензией клеток. При появлении большого числа розеток нельзя исключить возможность спонтанного розеткообразования Т-лимфоцитами с ЭБ. Инкубация при 37°С и встряхивание суспензии тормозят образование спонтанных розеток и способствуют образованию ЕАС-розеток. Образование ЕАС-розеток можно затормозить предварительной обработкой лимфоцитов трипсином или антилимфоцитарной сывороткой. Эритроциты можно отделить от РОК с рецепторами комплемента воздействием обработанной папаином антисывороткой мыши к компоненту СЗ. Розеткообразование не наступает, если ЕАС-комплекс обработать антикомплементарной сывороткой.

При помощи метода ЕАС-розеток можно создать детализованную функциональную классификацию. Он также имеет большое значение для оценки иммунного статуса при заболеваниях лимфатической системы (изменение числа ЕАС- и спонтанных розеток). Количество лимфоцитов с рецепторами к СЗ не вполне соответствуют числу В-лимфоцитов, вероятно, только часть В-лимфоцитов зависит от специальной функции СЗ-рецепторов. Исследования на мышах с удаленным тимусом и облученных мышах показали, что одна из субпопуляций В-клеток может потерять СЗ-рецепторы. На мембранах В-лимфоцитов новорожденных мышей присутствуют преимущественно рецепторы к иммуноглобулинам, рецепторы к СЗ появляются через несколько недель. По Parish, В-лимфоциты делятся на 4 субкласса: Fc⁺CR⁺, Fc⁺CR^-, Fc^-CR⁺, Fc^-CR^- (CR — рецептор комплемента). Хотя РОК представлены преимущественно В-лимфоцитами, все же нельзя исключить, что Т-лимфоциты или «нуль»-клетки несут рецепторы к комплементу. Эти предположения подтверждаются обработкой лимфоцитов нейраминидазой.

Поскольку выделяемые различными методами субпопуляции лимфоцитов частично перекрываются, результаты, полученные методом ЕАС-розеток для определения В-лимфоцитов, не являются полными. Классификация субпопуляций должна проводиться с учетом спонтанных розеток, ЕА-розеток (Fc-рецепторы) и мембранных иммуноглобулинов (иммунофлюоресценция).