Главная

• Антитела
• Реакция антиген-антитело
• Клетки иммунной системы
• История иммунологии
• Иммунохимия
• Продукты на страже иммунитета
• Вакцины
• Общие и частные проблемы иммунологии
• Основы иммунологии

Фотометрическое определение иммунных агрегатов

Фотометрическое определение иммунных агрегатов. Методика
Фотометрическое определение иммунных агрегатов. Оценка метода

Принцип метода. Инкубация раствора антигенов с моноспецифической сывороткой приводит к образованию иммунных агрегатов. Эта разновидность иммунных комплексов рассеивает проходящий световой поток, интенсивность которого можно измерить прямо или косвенно. При турбодиметрических измерениях определяют разность ΔU между исходной величиной U_o и получаемой величиной U₁ светового потока. В случае нефелометрии определяют количество света, отраженного под определенным углом к направлению падения светового потока. Интенсивность рассеянного света, или разность светового потока, прямо пропорциональна числу и величине иммунных комплексов. Соблюдая постоянные объемы реагирующих растворов, разведение сыворотки, время и температуру инкубации, можно определять концентрацию антигена в растворе при помощи калибровочной кривой. Калибровочную (стандартную) кривую получают, измеряя рассеяние света в растворах с известным содержанием антигена. На рисунке представлен ход лучей в лазерном нефелометре.

Ход лучей в лазерном нефелометре

Особая геометрия устройства позволяет улавливать свет, рассеиваемый иммунными комплексами (ИК), под очень небольшими углами. В современных лазерных нефелометрах достигается полное поглощение света, идущего в прямом направлении; этого эффекта не удается достичь с обыкновенными лампами ввиду непараллельности их лучей. Высокое постоянство излучения лазера позволяет получать хорошо воспроизводимые результаты. На других факторах, влияющих на воспроизводимость (длина волны, качество фотодиодов, обусловленное кюветой рассеяния), мы не будем останавливаться, так как они влияют на методику косвенным образом. Следует упомянуть о том, что при турбидиметрических измерениях рекомендуется пользоваться по возможности коротковолновым светом, поскольку он лучше рассеивается по разным направлениям.

Особенно важно избегать при работе длины волн, совпадающие с областями поглощения гемоглобина (400—420 и 500 нм). Хорошо воспроизводимые результаты были получены нами при длине волны 450 нм.